|
||
| ||
|
|
|
|
לכל יעדמ ןותיע - עדמ |
|
דיתעל ףונמ - תיטנג הסדנה :רמאמה םש
םייהנפוא סומעו ןונבל רודגיבא :רמאמה רבחמ .תיטנג הסדנהב םייסיסב תונורקע :רמאמה אשונ .הקיטנג :היגולויב :חתפמ תולימ 5 רפסמ 'ל ךרכ לכל יעדמ ןותיע "עדמ" ךותמ היגולונכטבו עבטה יעדמב םימוסריפל ןמציו דסומ תאצוה :תורעה תטיסרבינוא ךמסומ ,(1946) היכ'צ דילי (A. Levanon) ןונבל רודגיבא * ,הנויצ-סנב יגולויבה ןוכמב רקוחכ שמיש ,היגולויבורקימב ביבא-לת תא להנמ םויכ .ביבא-לתב האופרל רפסה תיב םעטמ רוטקוד ראותב רתכוה תירקבש "תיללכ היגולונכטויב" תרבחב תירלוקלומ-היגולויבל הקלחמה .םתואטבתהו םינג דודיב לש ימושיי רקחמב קסוע .תובוחרב ןמציו דמל .(1934) הפיח דילי (A. Oppenheim) םייהנפוא סומע * תנשמ .הינרופילק לש הטיסרבינואב רוטקוד ראותל הקיטנגו היגולויבורקימ רקחב קסוע .תירבעה הטיסרבינואה לש האופרל רפסה תיב לש לגסב רבח 1966 דוד ש"ע תירלוקלומ הקיטנגל הדבעמה להנמו ,םיקדיחב הרקב-ינונגנמ .הלס הנריאו .305 תרבוח ,242-247 םידומעב 1-8 תונומת האר * .םייהנפוא סומעו ןונבל רודגיבא תאמ /דיתעל ףונמ - תיטנג הסדנה םג היהש ,סדמיכרא עדונה ינוויה איצממהו יאקיסיפה ,יאקיטמתמה לע תדוקנ ול ןתנית ךא םאש ןעט יכ רמאנ ,הסדנהה יפנעל דוסיה יחינממ ונעגה יכ הארנ השרותה תסדנהב .ולוכ םלועה תא זיזהל לכוי התואנ ןעשימ תא ונתשיפתבו ונמלוע לש ותומד הארמב הנפימ-תדוקנ לש התבריקל םויה .ובש יחה-םלוע לע ,(תיטנגה הסדנהה) השרותה תסדנה לש היתונורקע לע דומענ הז רמאמב ינפב תחתופ איהש תויורשפאה לע עיבצנ ;םייסיסבה היגשומ לעו היתוטיש חונעיפל התמורת תא ראתנו ,םיאלקחו םיאפור ,תופורת-ינרצי ,םיניישעת .םיידוסי םייח-יכילהת םלואו - דבלב רשעכ - םינש-תרציק איה השרותה תסדנה לש הירוטסיהה ינפל לעופל-איצוהל היה ןתינ אלש המ יכ דע ,ריהמ הכ התוחתפתה בצק טנדוטס םויה עצבל לוכי ,רתויב תוללכושמה תודבעמב אל םג ,םינש רפסימ ונייה תיטנגה הסדנהה לש "הירוטסיהרפ"ל קיחרהל םיצור ונייה ול .ליחתמ ,תוריעסמה םישימחה תונשל ,רוחאל הנש 30-מ רתוי טעמ רוזחל םילוכי הסדנהה לש "המלוע םוחת" אוהש רמוחה - א"נדה הנבימ חונעיפ תונש .תיטנגה רדס רוריב) םינגה הנבימ חונעיפ תרשפאמ תיטנגה הסדנהה תויתשרות תולחמ לש ןוחביא ;םדאב ללוכ ,םינוש םירוציב (םידיטואילקונה םירמוח לש םרוציי םשל םייגולונכטויב םיכילהת חותיפ ;םיריעצ םירבועב לש תננכותמ הריצי ;יתיישעת ךרע ילעב םירמוחו םינומרוה ,תופורת ןוגכ .םייתשרות םימגפ לש יופיר ;םיפידע םייאלקח םינז תלוקלומ - (יטנניבמוקר) טבושמ א"נד אוה תיטנג הסדנהב חתפמ-גשומ א"נד יעטק לש רוביח - רקיעבו ,םיננכותמ הנבימ-ייוניש הרבעש א"נד א"נד יעטק לשו םינג לש םתלפכה רשפאמ הז ךילהת .םינוש תורוקממ .(םידיטואילקונ לש תובוקעמ) יגולונכטויבה ורוציי איה וגשוה רבכש םימישרמה םיחותיפה דחאל המגוד םיקדיחמ ותוא םיקיפמ רבכ םויכ .hGH ,םדאה לש הלידגה-ןומרוה לש תריצי לע יארחאה ןגה "לתשנ" הלא םיקדיחב - ךכ םשל דחוימב וסדנוהש רתויב תולבגומ תויומכב hGH לבקל היה ןתינ הז חותיפל דע .ןומרוהה לש (הסיפופיה) חומה-תרתוי תוטולב ךותמ ודודיב לש ךרדב ,םיבר םיישקבו תטולבש םירענו םידלי םתואב לופיט םשל שרדנ הלידגה ןומרוה .םירטפנ םינודינ ויה ךכמ האצותכשו ,תקפסמ תומכב תרצימ הניא םהלש חומה-תרתוי .רתויב םיכומנ ראשיהל ,ישונא א"נד עטק ,רציל וא ,ךותחל היה ךירצ הז גשהל עיגהל ידכ ןגהש ןפואב קדיח ךותל ורידחהלו ,hGH רוציי לע יארחאה ןגה תא ללוכה ,חילש-א"נרל ןגה קותעיש רשפאתיש ןפואב - רמולכ ,קדיחב אטנתהל לכוי לכ ןיא ומצע קדיחל יכ רוכזל שי .ןומרוהה רוציי םשל הז א"נרב שומישו אוהש ,הז רמוח רצימ אוה יוארכ סדנוהשמ - תאז תורמלו ,hGH-ב שומיש ןופצה עדימהש תורשפאהו קדיחב ישונא א"נד טבשל תורשפאה .םדאל ידוחיי הקיטנגה יכילהתש הדבועה לע תוססובמ ,םירמוח רוצייל שמשי ןכא וב ילעבבו םיחמצב ,םיקדיחב :ולוכ יחה םלועב םימוד םייסיסבה תירלוקלומה .םדאב ללוכ ,םייח םה םיקדיחהש םושמ ,ריהמו טושפ ,תיסחי ,אוה םיסדנוהמ םיקדיחב שומיש היבר רשוכב םינייטצמ םהש םושמו ,דחוימב "םיקנופמ" םניאש םירוצי (םיילמיטפוא) םייבטימ םיאנתב :םיתואנ םיאנת םהל םינתינ ךא םא ,םיהדמ רצוויהל םילוכי דדוב קדיחמש ךכ ,תוקד 20 לכ קלחתהל םיקדיח םילוכי עטק תליתש לש דדוב עורא ךכיפל .רפסימ תועש ךותב םיקדיח לש םידראילימ -ןוילימ הרשע =) ןוילירט 10 הממי רובעכ בינהל לוכי קדיחב א"נד .ןג (cloning) טוביש לש ךילהת והז .םיהז א"נד יעטק (10^13 ,ןוילימ םידימסלפו םיקדיח חלצומ ןפואב םינג טבשל ידכ םישרדנה םיבלשה תא טוריפ רתיב ןחבנ הבה רוציי םשל םיקדיחב השענש שומישב דקמתנ .תואטבתה ידיל םאיבהלו םימוחת םג ןייצנ ךא ,םדאה תלעותל םינוש םירמוח לש יגולונכטויב .םירחא םירוציב תוירקיעה תויטנגה תודיחיה תא םיווהמה ,םימוזומורכל ףסונ לופכיש תורבועה ,"תוימונוטוא" א"נד תודיחי םייח םיאתב תומיק ,םייח א"נד - לשמל ,םייוצר א"נד יעטק רבחל ןתינ ולא תודיחיל .יאמצע ןפואב .תואטבתהו הלפכה םשל םיקדיחל רידחהל ןתינ ולא תוטבושמ תודיחי ;ישונא :תויאמצע א"נד תודיחי לש תוירקיע תורוצ יתש תומיק םיקדיחב א"נד לש תועבטכ םירוגס םיעטק םה םידימסלפה .םיגפוירטקבו םידימסלפ .םינוקילפר םיווהמ םה ,רמולכ - יאמצע םלופכיש ךילהתש ,יטוח-וד םידימסלפ יבג לע ,םנמואו .קדיחל םיבושח םינג לולכל םילוכי םידימסלפ ןוגכ תונוכת (יאקדנופה קדיחה) םתוא ליכמה קדיחל םינקמה םינג והוז ,םימיוסמ (םיניסכוט) םינלער לצנל תלוכי ,םייטויביטנא םירמוחל תודימע ךרדב .קדיחה לש ושומישל תונוש תוינגרוא תובוכרת לש ןקוריפ תורשפאו ךכל תוירקיעה תוביסה תחא .ותוא ןייפאמו יאקדנופל ידוחיי דימסלפה ללכ לופכיש ינונגנמ םישרדנ םיוסמ דימסלפ לש ולופכיש םשל יכ איה תעבונ דימסלפה לש ותואמצע .םירדגומ םיאקדנופב קר םימיקה ,םיידוחיי תליחת םוקמ תא תנמסמה תידוחיי םידיטואילקונ תבוקעמ ליכמ אוהש ךכמ רוזיא" תיעוצקמ הגעבו ,origin) :הצנה רתא והז .לופכישה ךילהת םייעבט םידימסלפ םנשי .לופכישה ךילהת ליחתמ ובש רתאה - ("ori-ה ירתא רפסימ םיליכמה (םידיטואילקונ יפלא-תורשע םייושעה) "םייקנע" .לופכיש םירשפאמה םינובלח רפסימ לש םתריצי תא םידדוקמה הצנה ,םילודג םידימסלפ לש םיעטקמ ונבינש הלאכבו ,רתוי םינטק םידימסלפב הלא םינטק םידימסלפ .קדיחה ינובלח ידי-לע לעפומה דדוב הצנה רתא יוצמ ומכ .(1 הנומת) תיטנג הסדנה יכילהתב (םירוטקו) םיאשנכ םישמשמ עצבתמו הצנהה רתאב ליחתמ דימסלפב א"נדה לופכיש ,קדיחה םוזומורכב .םידגונמ םינוויכ ינשב םימיק :דימסלפל ינייפוא אתב םיוסמ דימסלפ לש םיקתועה רפסימ םיעיפומה םידימסלפ םימיקו ,תואמל עיגמ אתב םהיקתוע רפסימש םידימסלפ ידי-לע עבקנ הז רפסימ .דבלב םיקתוע ינשב וא ,דדוב קתועכ אתב םיקתועה רפסימ ,תיטנג הסדנהב םילבוקמה םיאשנב .םיבכרומ הרקב-ינונגנמ .אתב 50-30-ל עיגמ הלא ןיב - תיטנג הסדנהב םישמשמה םינושה םיכילהתה תא ןיבהל ידכ םיכילהתב ךשמהב קוסענ - םהב םירושק םניאש ןיבו םידימסלפב םירושקה ןתינ דציכ ררבנ ,םינגה תואטבתהב םירושקה םיירלוקלומ-םייגולויבה םיעטק לש םיובירל םיכרדה לע דומענו ,םיעטקה תא תוחאלו א"נד עוטקל .םיוהיזלו הלא א"נדה ראשמ ידימסלפ א"נד לש הדרפה תורשפאמה תוטיש רפסימ תורכומ א"נדל תוינייפואה תוילקיסיפה תונוכתה לע תוססובמ ולא תוטיש .קדיחבש לקשימהמ תיפלא ךרעב) תיסחי ךומנ ירלוקלומ לקשימ - ידימסלפה ידימסלפה א"נדה תא .תילגעמה ותרוצו ,(קדיחה םוזומורכ לש ירלוקלומה תואנ זוכיר תלעב הסימתב לופיט ,לשמל .םייח םיאתל רידחהל ןתינ הקונמה ןזהש ,ץופנ קדיח ,E. Coli) ילוק היכירשא קדיחב (Ca++) ןדיס-ינוי לש (רקחמב שומישל דואמ םילבוקמ םינושה וינזשו ,םייעמב יוצמ ולש ירוקמה הנוכמ םיאתל א"נד לש ותרדחה ךילהת .וכותל םידימסלפ תרדחה רשפאמ ינובלחב דימסלפה שמתשמ אתל ותרידח םע דימ .(היצמרופסנרט) הרמתה .ול ינייפואה םיקתועה רפסימל דימסלפה לפכתשמ ךכ .אתה לש לופכישה תרמתה :המגודל .תובושח תונוכת קדיחל םורתל דימסלפה לוכי ךכ ךותב ותיינבל עדימ אשונה ןג) bla ןגה תא ליכמה דימסלפ תרדחה ידי-לע קדיח תודימע קדיחל הנקת (ןיליצינפ קרפמה םיזנא אוהש ,זמטקל-אתב ןובלחה לש .ןיליצינפ ינפב ליגרה ןמ סוחד הנבימב אתב תואצמנ דימסלפה תולוקלומ יכ ןייצל יואר ומצע ביבס ףפולמ ידימסלפה א"נדה יכ איה ךכל הביסה .א"נד יבגל םידחוימ םימיזנא םייוצמ את לכב יכ ררבתמ .(super-coiling) לע-ףופילב א"נדה תמגוד ,לגעמכ יונבה א"נדב םיפופילה רפסימ תעיבק לע םיארחאה .ידימסלפה םיקדיחב םיפיגנ .םיגפוירטקבב שומיש איה וטוביש םשל קדיח אתל א"נד תרדחהל הינש ךרד ;םיקדיחב םיברתמה םיפיגנ םה (םיקדיח ילכוא - תינויב) םיגפוירטקבה וא א"נד) יטנג רמוח תדיחי ללוכ גפה .םיגפ םינוכמ םה רוציק ןושלב :םיגפ ינש רקיעב םישמשמ תיטנגה הסדנהל .תינובלח תפטעמב הפוטעה (א"נר אדבמל לש א"נדהש אלא ,א"נד יפיגנ םהינש .M13-ו (אדמל :ירק) אדבמל םיאשנכ םישמשמ הלא םיגפ .יטוח-דח אוה Ml3 לש הז דועב ,יטוח-וד אוה .םטוביש םשל א"נד יעטק לש םתרדחהל ;רתוי רצ "בנז"ו בחר "שאר" תרצוי אדבמל גפה לש תינובלחה תפטעמה הקרזהל איבמ קדיחל גפה ןיב םיאתמ עגמ .שארה ךותב זורא יטנגה רמוחה .קדיחה את ךותל (ףיגנה לש ןיערגה תצמוח) יפיגנה יתשרותה רמוחה לש שכור ךכו ,קדיחה לש קותעישה תכרעמ תרזעב קותעיש רבוע יפיגנה א"נדה .יפיגנה יתשרותה רמוחה ידי-לע תודדוקמה תונוכת קדיחה ומצעל לולסמ :םילולסמ ינשמ דחא יפ-לע להנתהל הלוכי אדבמל גפה תוחתפתה ,סיזיל) קדיחה-את סרהב םייתסמ יטילה לולסמה .ינגוזיל לולסמ וא יטיל גפל םיהז ,םיאצאצ םיגפ 100-כ רורחיש ךות ,(הסמה ,קוריפ :תינויב יפיגנה א"נדה דכלתמ ינגוזילה לולסמב .אתל רדחוה ולש א"נדהש ,ירוקמה ףיגנהו ,קדיחה םוזומורכ לופכיש םע לפכתשמ אוהש ךכ ,קדיחה א"נד םע הניא יפיגנה א"נדה תיברמ הז לולסמב .קדיחה תייבר םע דבב-דב ,הברתמ קר .אתל םיינסרה םינובלח תריציב אטבתמ אוה ןיאש ךכ ,קותעיש תרבוע ויתובקעב ,ינגוזילה ףיגנה א"נד לש קותעיש ליחתמ םימיוסמ םיאנתב םשה ןאכמ ;(סיזיל) קדיחה סרהב םיתסמ רבדהו ,ףיגנה יביכרמ םירצונ .סרה ללוחל לוכיה לולסמ - "ינגוזיל לולסמ" ינשמ דחא לכב םישחרתמה םיכילהתה תא טוריפ-רתיב ראתנש יוארה ןמ .א"נדה תזתניסל הצנהה רתא לש הלעפה תשרדנ יטילה לולסמב .םילולסמה .קדיחב םרוקמש םינובלחו גפב םרוקמש םינובלח תרזעב תישענ וז הלעפה םינובלחה לש ריהמה םרוציי ליחתמ גפב קדיחה תקבדה רחאל תוקד רפסימ ינובלח םישמשמ שארה תיינב ךילהתב .ובנזו גפה שאר תינבב םיפתתשמה רמגב .רמגומה גפב םיללכינ םניא ףוסבלש ,םימוגיפכ יאקדנופה-קדיחה ,תפטעמה-ינובלח תינבל תינכותכ וב שומישה רמגבו יפיגנה א"נדה לופכיש לע םיארחאה םינג םילעפומ הקבדהה רחאל העשכ .םירמגומ םיגפ םינגראתמ ,םיאצאצ-םיגפ ונממ םיררחתשמו ,ץצופתמ אתה ,קדיחה לש אתה ןפוד קוריפ יטיל רוזחמב ליחתהלו ,םתביבסב םיאצמנה םיקדיח דימ ףוקתל םילגוסמש חטשימ יבג-לע םיגפ לש (לילד רוזיפ - רמולכ) הלילד "העירז" .ףסונ רוח תעפוהל ,ךכיפל ,תמרוג ("םיקדיח דברמ") םיקדיחב תופיפצב עורזה הרדיס הלחהו קדיחל ערזנש-גפ דמצינ וב םוקמ לכב ,םיקדיחמ יקנ ,ףוקש הנוכמ םיקדיחה דברמב ןיעל-הארנה הזכ ףוקש רוח .םייטיל םירוזחמ לש .קלפ בכעמ הנוכמה ,דחוימ יפיגנ ןובלח אתה זתנסמ ינגוזילה רוזחמה ךלהמב .יטילה לולסמל םישורדה םינג םתוא תואטבתה ענומ הז ןובלח .(רוסרפר) ,גפורפה ,"יומסה" גפה לש וחוכ הלגתמ בכעמה סרהנ םהב םיאנת םתואב קר לולסמב תוחתפתהל תושורדה גפה תונוכת תולעפומ הלא םיאנתב - םיאת סרהב .יטילה ינאיורט סוסכ ףיגנ .הדבעמ יאנתב תוחתפתהל םישורד גפה לש םינגה לכ אל יטילה לולסמב םג רשפא ורסוהש םיקלחה םוקמבו ,יפיגנה םונגב םירסח רוציל ןתינ ךכיפל םונגה ,אדבמל גפב .טובישל ,ןכ םא ,חונ יפיגנה א"נדה ;רז א"נד טבשל תוגוז 50,000-כ לש תבוקעמ םיווהמה ,םינג 50-מ הלעמל ליכמ ולוכ יפיגנה םיזנאה ףתתשמ גפה שאר ךותב א"נדה תזירא ךילהתב .םידיטואילקונ םינג לש םכרואכ ןכרואש תובוקעמל א"נדה תא עטוק הז םיזנא .זנימרט סוק-ירתא םינוכמ ,זנימרטה לעופ םהבש ,עוטיקה-ירתא .םימלש םייפיגנ .(COS) םיגפ רזחשל תורשפאה איה אדבמל גפה לש תישומישו תניינעמ הנוכת םע יפיגנ א"נד לש ,םיתואנ םיאנתב ,בובריע - "הנחבמב" ,יתוכאלמ ןפואב ליבומ הזכ בובריע ;בנז לשו שאר לש תורמגומ-יתלב ןובלח תודיחי וב לפטל ,א"נד תוקנל ןתינ יכ אוה רבדה שוריפ .םיניקת םיגפ תונגראתהל םיגפ ישאר ךותב טבושמה א"נדה תא זוראל ,םייוניש וב ךורעלו הנחבמב א"נד רידחהל ןתינ הזכ רזחושמ גפ תרזעב ."םיסדנוהמ" םיגפ לבקל ךכו הדימב ליעי הז הרדחה-ךילהת .תיסחי תולקבו תוליעיב ,םיקדיח-יאתל .םידימסלפ תרזעב הרמתהמ תרכינ אוה יבטימה ךרואה .גפ לש שאר ךותל רידחהל ןתינ א"נד עטק לכ אל .זנימרטה תלועפמ יעבט ןפואב תורצונה ןגה-תודיחי ךרואכ הכרואש תבוקעמ ןניא (ב"זק 50-מ הלעמל תוליכמה ולאכ) ידמ-תוכורא א"נד תולוקלומ ידמ תורצק א"נד תולוקלומ וליאו ,גפה שארב א"נדה תזירא תורשפאמ גפ שאר לש ותיינב תוענומ (ירוקמה יפיגנה א"נדה ךרואמ 78%-מ תורצק) .םויס ידיל העיגמ הניא (ולש הזנגופרומה) גפה תונגראתה ךכיפלו ,ןיקת א"נדה יעטק תוצקב הריתומ זנימרט םיזנאה השועש עוטיקה תלועפ .םידיטואילקונ 12 ןהמ תחא לכ ךרואש ,תומילשמ תויטוח-דח תובוקעמ הרוצה - תילגעמ תעבטל גפה םוזומורכ לש הריהמ הריגס תרשפאתמ ךכיפל .לופכישה ךילהת תלחתה םשל השורדה םישמשמה ,אדבמל גפה לש םיבר םינז םירקוחה תושרל םידמוע םויכ םיאשנכ םישמשמה םיברה םינזה תא .םיקדיחל םייוצר םינג תרדחהל םיאשנכ םה הרדחהה יאשנ .הפלחה-יאשנו הרדחה יאשנ :תוצובק יתשל גווסל ןתינ םוקמ תאו ,גפה לש ירוקמה א"נדהמ םיזוחא 20-10 םהמ ואצוהש םיפיגנ ינז ןתינ הפלחהה יאשנב .רקוחל יוצרה א"נדה ,רז א"נדב אלמל ןתינ רסחה א"נד לש רתוי םיכורא םיפצר טבשל ןתינ ךכ - רתוי םיכורא םיעטק ףילחהל אשנכ ןהו הרדחה-אשנכ ןה ,םיתיעל ,שמתשהל ןתינ ומצע גפ ותואב .יוצר תא ראתנ ךשמהב) םישמתשמ םהב א"נדה עוקיב ימיזנאל םאתהב ,הפלחה .(הלא םימיזנא לש םהיתונוכת לע לקהל ,תובורק םיתיעל ,לוכי תוכורא א"נד תובוקעמ לש טוביש לש וא םיאת לש רתוי ןטק רפסימ ןוחבל שי הז הרקמבש רחאמ ,רקחמה תרזעב הרמתהה ךילהתב .טוביש רבעש םיוסמ ןג רחא הקירסה ךלהמב םיפיגנ לככ - ב"זק 10-5 תויושעה תובוקעמ תוליעיב רידחהל ןתינ םידימסלפ ,ןתינ םיגפ תרזעב וליאו ,רתוי השק אתל התרדחה רתוי הכורא תבוקעמהש .רתויו ב"זק 20 ןכרואש תובוקעמ רידחהל ,רומאכ ןיערגה (תצמוח) עוקיב א"נד םיזנאה :םיידוחיי םימיזנא םיפתתשמ א"נדה טוביש ךילהתב ימיזנאו ,זגיל - א"נד החאמה םיזנאה ,רוחאל קתעשמה םיזנאה ,זרמילופ .הלא םימיזנא לש םתוליעפ רואתל התע הנפנ .עוקיב שי םיקדיחל יכ רברא יציוושה רקוחה הליג הנש םירשעמ הלעמל ינפל םימיזנאה .אתל רדחש רז א"נד (םיעטקל תכתוח) תעקבמה תיטמיזנא תכרעמ םמש לש ילולימ םוגרת) "םיליבגמ םימיזנא" םג םיתיעל םינוכמ םיעקבמה תמייק םיקדיח םתואב יכ אצמ םג רברא .(restriction enzymes ,יזעולה םייוניש תכרוע וז תכרעמ .תדגנתמ התלועפש ,תרחא תיטמיזנא תכרעמ תכרעמ .הילע לועפל םילוכי םניא בוש עוקיבה ימיזנאש ןפואב ,א"נדב רייש רוביחל םימרוגה םימיזנא - היצליתמ ימיזנא תללוכ וז תימיזנא ימיזנא םינוכמ הלא םימיזנא .ןיזוטיצו ןינדא םיסיסבל (CH3-) יליתמ .(modification enzymes) :היצקיפידומ II הנומיסש הצובקה .תוצובק שולשל קלחל ןתינ עוקיבה ימיזנא תא III-ו I ןנומיסש תוצובקהש דועב ,דבלב עוקיב םישועה םימיזנא תללוכ םיסיסבה לש היצקפידומ :הלופכ הלועפ ילעב םהש םימיזנא תוללוכ ולא תוצובק יתשל םיכיישה םימיזנאה .א"נדה תלוקלומ עוקיבו םיינקנחה ךילהת .םייליתמ םירייש תוליכמ ןניאש א"נד תולוקלומ םיעקבמו םיהזמ הצובקל םיכיישה םימיזנאה .ATP קוריפמ תקפומ וזו ,היגרנא ךרוצ עוקיבה ,א"נדה תלוקלומב םיידוחיי הרכה-ירתא םיהזמ םה ,ילוק יקדיחב םרוקמ I םה III הצובקמ םימיזנאה .ומצע הרכהה רתאמ המ קחרמב התוא םיעקבמו תא םיעקבמ םהו ,םימיוסמ םיגפ לש םונגב לולכ םניינבל עדימהש םינובלח .הרכהה רתאמ המ-קחרמב ,םיילוגס םירתאב א"נדה תלוקלומ םימיזנא םה הלא .II הצובק ימיזנא רקיעב םישמשמ תיטנג הסדנהב הרכהה-רתא ךותב השענ עוקיבה ללכ-ךרדבו ,א"נדב םיילוגס םירתא םיהזמה םירכומו ,םינוש םיקדיחמ םיקפומ וז הצובק לע םינמנה םימיזנאה .ומצע תטיש ךירצמ אוהש אלא ,םירקוחל הכרב אוה הז עפש .םהמ 400-מ הלעמל קדיחה םש לע הנוכמ םיזנא לכ :לובליב עונמל ידכ ,תצקמב "השבי" ןומיס קדיחהמ וצומש םימיזנאה :המגודל .ויוליג רדס יפ לעו ,קפוה ונממ .Hpa II-ו Hpa I םינוכמ Haemophilus parainfluenzae םיללוכה םירתא םיהזמ ,II הצובק ,וז הצובק םע םינמנה עוקיבה ימיזנא .ירטמיס אוה הרכהה-רתא םירקימה בורבו ,םיסיסב השיש וא השימח ,העברא תווצק") םייטוח-דח םיעטק םירצונש ןפואב א"נדה תא םיעקבמה םימיזנא שי םה ,הלוכ א"נדה תלוקלומ ומכ,תווצקהש ןפואב םיעקבמ םירחא ;("םיקיבד .םייטוח-וד תא ההזמו ,ןושארה גוסל ךייתשמ ,ילוקה קדיחב ורוקמש ,EcoR I םיזנאה :רתאה 5'-GAATTC-3' 3'-CTTAAG-5' תבוקעמ התוא םיללוכ א"נדה ילידג ינשש ךכב תאטבתמ רתאה לש הירטמיסה תווצק םיעיפומש ןפואב הז רתא ,רומאכ ,עקבמ EcoR I .םידיטואילקונ :םייטוח-דח ,םיקיבד 5'-G AATTC-3' 3'-CTTAA G-5' ,א"נד לש םייטוח-דח םיעטק םהילא דימצהל םילגוסמ םייטוח-דחה תווצקה C ,T םע A) םיסיסבה גוויז יללכ יפ-לע תומיאתמ תובוקעמ םיללוכ הלא םא ."םיקיבד תווצק" םיוניכ ןאכמו (G םע ונל שמשי םיקיבד תווצק ריתומה II הצובקמ עקבמ םיזנאל תפסונ המגודכ :רתאה תא ההזמה ,Sac I םיזנאה 5'-GAGCTC-3' 3'-CTCGAG-5' :ולא םיקיבד תווצק םירצונ הז םיזנא לש עוקיבה תלועפמ 5'-GAGCT C-3' 3'-C TCGAG-5' :רתאה תא Sma I םיזנאה ההזמ ,הלא םימיזנא ינש תמועל 5'-CCCGGG-3' 3'-GGGCCC-5' :ךכ ,םייטוח-וד םה םירצונה תווצקהש ךכ ותוא עקבמו 5'-CCC GGG-3' 3'-GGG CCC-5' .א"נד לש יטוח-וד הצק לכל תוחאתהל םילוכי הלא םיקיבד-יתלב תווצק זגיל תרזעב ךותיר אצוי ,םיקיבד-יתלב וא םיקיבד םהיתוצק םא ןיב ,א"נד יעטק לש יוחיא ,T4 גפב וקבדוהש םיקדיחמ קפומ םיזנאה .זגיל םיזנאה תרזעב לעופל .ATP קוריפב הרוקמש היגרנא תכרוצ יוחיאה תלועפו םימיזנא ינש לש םתלועפ תא ראתנו םידקנ יוחיאה תלועפ תא םיגדהל ידכ דבלב-םיעקבמ םימיזנא םהינש .Bgl II-ו BamH I םיזנאה :םיפסונ םיעקבמ עקבמ BmaH I .םידיטואילקונ תוגוז 6 ינב םירתא םיהזמה ,(II הצובק) :ךכ 5'-GGATCC-3' -----> 5'-G GATCC-3' 3'-CCTAGG-5' 3'-CCTAG G-5' :ךכ ועקבמו ,הנוש רתא ההזמ Bgl II םיזנאה 5'-AGATCT-3' -----> 5'-A GATCT-3' 3'-TCTAGA-5' 3'-TCTAG A-5' :ףצרה רצווי הלא םיעקבמ םימיזנא ינש ירצות לש ,זגיל תרזעב ,יוחיאמ 5'-GGATCT 3'-CCTAGA הירטמיס ןיא ונראתש המגודב הרצונש םיסיסבה תוגוז השיש תב תבוקעמב םלואו .Bgl II-ו BamH I םיעקבמה םימיזנאל תרכומ איה ןיאו תמלשומ הווהמה ,םיסיסב תוגוז העברא ןב ירטמיס ףצר אוה תבוקעמה לש "הביל" :ךכ ,םימיוסמ םיעקבמ םימיזנאל הרכה-רתא 5'-GATC 3'-CTAG תא םיעקבמ םהינש .הז ףצר םיהזמ ןכא Sau3a-ו Mbo I עוקיבה ימיזנא .ויהי רשא ויהי ,ול םיכומסה םידיטואילקונל הרכהה רתא ןיב א"נדה :ויהי הלא םימיזנאמ דחא לש ותלועפמ ורצוויש םיקיבדה תווצקה 5'-N GATC N-3' 3'-N CTAG N-5' יקוח יפל םימיאתמ תוגוזהש דבלבו) והשלכ דיטואילקונ ןמסמ N רשאכ .(גוויזה ,ובכרהמ עבר הווהמ (A,T,C,G) םידיטואילקונה תעבראמ דחא לכש א"נד םיסיסב תוגוז 256-ל תחא םידיטואילקונ 4 ןב םיוסמ ףצר ,עצוממב ,ליכי (4^6) 4096-ל תחא קר עיפוי םידיטואילקונ 6 ןב םיוסמ ףצר .(4^4) םיחאמו םיעטקל א"נדה תא םיכתוח טובישה ךרוצל .עצוממב ,םיסיסב תוגוז הלא םירקימב ףידעהל שי ללכ-ךרדב .םיאתל הרדחה םשל ,םיאשנ םע םתוא םיזנא ינפ-לע (םידיטואילקונ תוגוז 4) רצק ולש הרכהה-רתאש םיזנא עקבמה םיזנאה תלועפש דבלבו ,(תוגוז 6) רתוי ךורא ולש הרכהה-רתאש יתלב םיבר הרכה-ירתא םירתונ ויתובקעבש ,יקלח עוקיב .תיקלח היהת ,"וחוכ אולמ תא ןיגפהל" עקבמה םיזנאל םירשפאמ ןיא םא שחרתמ ,םיעקובמ .ותלועפ ךשמ לשו םיזנאה זוכיר לש תואנ ףורצ תרזעב תאז ינב א"נד יעטק לש הרדחה תרשפאמה תכרעמ ונדיב שיש ,המגודכ ,חיננ ךותחנ םא .םיוסמ ןג טבשל שקבנ התרזעבשו ,םיסיסב תוגוז 10,000-5,000 ידמל ההובג תוריבס תמייק ,BamH I םיזנאה תרזעב םיעטקל א"נדה תא הרכה-רתא יופצ םא ירהש) וניכרצל ידמ םיכורא ויהי א"נדה-יעטקמ םיברש ירתא ינש ואצמיש טלחהב ןכתיי ,עצוממב םיסיסב תוגוז 4096 לכב דחא .(תרכינ הדימב םילודג םיקחרמב ןהו ,הברהב הזמ רצק קחרמב ןה הרכה םהש םיעטקה לע ללכ אצמיי אל םינינועמ ונא וב ןגה יכ ,ןכתי ךכיפל ךותב םקוממ BamH I לש הרכהה-רתא םא ,ןכ-לע-רתי .יוצרה ךרואה ילעב ללכ לכונ אלש ירה ,הז םיזנא תרזעב אלמ עוקיב א"נדה תא עקבנו ,ןגה Sau3a םיזנאה תרזעב יקלח ךותיח ,תאז תמועל .ליעפו םלש ןג דדובל ונא םהב םיעטק םתואו ,טעמכ יוצר ךרוא לכב א"נד יעטק תריצי רשפאמ .טבשלו דדובל ןתינ םיניינועמ אשנ םע יוצר ןג - לשמל) א"נד יעטק תוחאל ןתינ דציכ ונראת הכ דע םייטוח-דח תווצקה ינש םא וא ,םייטוח-וד תווצקה ינש םא (םיאתמ יעטק תוחאל ןתינ דציכ .םיסיסבה גוויז יקוח יפל ,םימאות םיסיסבהו תווצק ינש תוחאל דציכו ?יטוח-וד הצק - רחאלו יטוח-דח הצק דחאלש א"נד ךכל םיכרדה תחא ?תומאות ןניא םהב םידיטואילקונה תובוקעמש םייטוח-דח תרזעב עוקיבמ רצונש הזכ ןוגכ) יטוח-דח הצקל םילשמ טוח-עטק תריצי איה זרמילופ-א"נד םיזנאה תרזעב תאז תושעל ןתינ (BamH I תרזעב וא EcoR I ."םייטתניס םימאתמ"ב שומיש איה תרחא ךרד .םיישפוח םידיטואילקונו ,דבלב םידיטואילקונ 12-6 ךרואב ,תורצק א"נד תולוקלומל איה הנווכה יטוח-דח הצקל םאותו יטוח-דח ינשה הצקה דועב יטוח-וד םהלש דחא הצקש .עוקיבב רצונש ןג לש ותואטבתה הנוכמה ךילהתב ,חילש-א"נר לש הלוקלומ תרצונ ןגה-תבוקעמ יבג לע .ןגה לש הזל - עדימ-הוושו - םאות ףצר היושע א"נרה תלוקלומ .קותעיש עדימה חנעפתמ ובו ,םימוזובירה יבג לע שחרתמ ,םוגרת הנוכמה ,אבה בלשה הצמוח לש התבצה תעבוק םידיטואילקונ לש השלש לכ :חילש-א"נרה לש .ךלוהו-הנבנה ןובלחב תמיוסמ תחא תינימא םאותה קתוע אוה קותעישה ךילהתב רצונש חילש-א"נרה היפל ,הנעטה םהילעש ,םיקדיחב םינגה לש םבור-בור יבגל תספות ןגה תבוקעמ תא קיודמב ,ךכיפל ,התיה הבר .תירלוקלומה הקיטנגה םוחתב דואמ םיבר םירקחמ ושענ םירוצי) םיטוירקואא םיאתב יכ ,םיעבשה-תונש תליחתב ,ררבתנשמ העתפהה םינורבאו ,תימורקב ףקומ ,רדגומ ןיערג םהיאתבש םירוצי םה םיטוירקואא הירדנוכוטימ ןוגכ ,ןהב םיפקומ וא ,תוימורק םייושעה םירחא םה םיקדיחה - הלאכ םינורבא ירסח םיקדיחה יאת .םיטסלפורולכו תיברמ .םינגה תיברמב וז תוהז תרמשנ אל ,םיפיגנב ןכו (םיטוירקורפ םיאטבתמ םניאש םיפצר םכותב םיליכמ םיטוירקואא םירוצי לש םינגה תשמשמ חילש-א"נרה תלוקלומשכ - רמולכ ,םוגרתה ךילהתב חילש-א"נרב .םינורטניא םינוכמ ןגבש הלא "םימלענ" םיפצר .ןובלחה ןינבל תינבת םינוכמ ,ןובלחה תינבב יוטיבל ףוסבל םיאב ןכאש ןגה לש םירוזא םתוא םיטוירקואאב קותעישה ךילהתב יכ ךכ לע םידיעמ םיבר םירקחמ .םינוסכא ללוכ ,ולוכ ןגה לש קיודמב-םאות קתוע הווהמה חילש-א"נר הליחתכלמ רצונ הריפתו ,םיפדועה םיעטקה תרסה לש ךילהת שחרתמ ךשמהב יכו ,םינורטניאה :תילגנאב) רובחיש ותונכל ןתינש ךילהת ,הזל הז םינוסכאה לש תקיודמ עדימה תא קפסל "לשב" חילש-א"נרה רובחישה ךילהת רחאל קר .(Splicing יושע ןיבולגומה ןובלחה ןינב תא דדוקמה ןגה ,המגודל .ןובלחה ןינבל ןובלחה תריצי לע יארחאה ןגב וליאו ,םינורטניא ינשו םינוסכא השולש םינורטניאה לש םתרסה ךילהתב .םינורטניא 50-מ הלעמל םייוצמ ןגלוק תאזכ תפדוע-הרסה .םינורטניא ינש ןיב אצמנה ןוסכא ןגה ךותמ תאצל לולע השענה רובחיש ךילהת .ןגה רצות אוהש ,ןובלחה הנבימב יונישל םורגת ותואש הרקימב - ןיקתו יעבט תויהל לוכי ,ןוסכא לש תפדוע-הרסה תובקעב עובנל לוכי םג אוה ;םינוש םינובלח ינש לש הזתניס דדוקמ ומצע ןג .ליעפ יתלבל ךפוה ,ןגה רצות ,ןובלחה היתובקעבש ,היצטוממ ידי-לע ,דבועמ יתלב ,ירוקמ בצמב אוהשכ יוצר ןג טבשל אופיא ןתינ תרמגומה ,תדבועמה ותרוצב ותוא טבשל םג ןתינ ךא ,םוזומורכה ןמ ודודיב .םוגרתה ךילהתב תשמשמה ,הלשבה חילש-א"נרה תלוקלומ יפ לע - א"נד רצייל ןתינ יכ ררבתמ ? תרמגומ א"נר תלוקלוממ ןג םיטבשמ דציכ יפ-לע א"נד לש הינב .cDNA הנוכמ הזכ א"נד .חילש-א"נר לש קיתעת אוהש א"נר ךפוהמב םיקתעשמ הליחתב :יבלש -וד ךילהת איה חילש-א"נר תלוקלומ ;(reverse transcriptase) רוחאל-קתעשמה םיזנאה תרזעב ,יטוח-דח א"נדל יטוח-דחה א"נדל םילשמ טוח תינבל זרמילופ-א"נד םיזנאה שמשמ ינשה בלשב .יטוח-וד cDNA רצונ ךכ .א"נד לש םיישפוח םידיטואילקונמ השעמו הכלה - טוביש המ :תובר תולאש תודמוע םיוסמ ןג לש דודיב ומצע לע לטנש רקוח ינפב חילצהל ידכ ןיכהל וילעש (םיטנניבמוקר) םיטבושמה א"נדה יעטק רפסימ יכ אדוול דציכ ? יוצרה ןגה תא תוהזל ןתינ ךרד וזיאב ? ותמישמב ? םייוצרה םיטבושמה א"נדה יעטקל וחאתה םיאשנה תיברמ תירפס" תריצי אוה םינג לש םטוביש ךילהתב ןושארה בלשה ,ישעמ ןפואב וא ,םיוסמ יח-רוציב םרוקמש א"נד יעטק לש ףסוא איה םינג-תירפס ."םינג יאת לש םונגה .םימיאתמ םיאשנל יוחיא ורבעש ,ולש cDNA יעטק לש ףסוא תוגוז דראילימ 3-מ הלעמל ליכמ - לודג אוה ,םדאה ללוכ ,םיקנויה יעטקל םונגה תא םיעטוק םא יכ ררבתמ .םינג 100,000-כ ליכמו ,םיסיסב הירפסהש ידכ םיטבושמ םיעטק ןוילימכב ךרוצ שי ב"זק 20 לש ךרואב א"נד ליכמה ,קדיח את .םינגה לכ תא לולכת איהש ידכ - רמולכ ,תגצימ היהת הכירצ ורובע המוד הירפס ,םיסיסב תוגוז ןוילימ 5-כב םינג 5,000-כ יקדייח ןג רותיאש ,אופיא ,רורב .דבלב םיטבושמ םיעטק 1000-כ ליכהל יכ ןבומ םג ;םיוסמ ישונא ןג לש ורותיאמ רתוי הברה טושפו חונ והשלכ .רתוי ריהמ יוצרה ןגה רותיא היהי ןכ ,תטבושמה א"נדה תומכ לדגתש לככ שמתשהל ןתינ טבושמ א"נד םיליכמה םיאשנה זוחא המ עובקל ידכ רמוח לש םיוסמ גוסל תודימע םתוא ליכמה קדיחל םינקמה ,םידימסלפב םינקמה םינג ללוכה דימסלפב טובישה ךרוצל םישמתשמש חיננ .יטויביטנא רבוע יוצרה א"נדה עטק םא .ןילקיצרטט ינפבו ןיליציפמא ינפב תודימע תונקהל ךישמי דימסלפה ,ןילקיצרטטל תודימע הנקמה ןגה ךותל יוחיא האצותכ שבתשה הז ןג ירהש ,ןילקיצרטטל אל ךא ,ןיליציפמאל תודימע תודימעה םיקדיחה-תובשומ לכ תא רתאל לכונ התע .רחא א"נד םע ויוחיאמ תובשומ וליא ררבל ןכותמו ,(ןהילא רדח דימסלפהש ולאכ) ןיליציפמאל .שקובמה זוחאה תא תולקב עובקל ךכו ,ןילקיצרטטל תודימע ןניא ,םיפיגנ תרזעב איה םטוביש םשל א"נד יעטק תרדחהל תפסונ ךרד ,רוכזכ ןתינ ."תועורז" יתשו יזכרמ קלח יושע גפה לש א"נדה .אדבמל גפה - ןוגכ ןיב רידחהל ומוקמבו ,יזכרמה קלחה תא גפה לש םונגה ךותמ ריסהל קלחה לש הרסה-"חותינ" ורבעש םיגפ םתואב .יוצרה א"נדה תא תועורזה רצק היהי א"נדה ,חלצ אל וטבשל שיש א"נדה םע יוחיאה ךילהתש ךא יזכרמה ךכו ,םיאשנ םיווהמה םיגפ קר ונגראתי ךכיפל .ןיקת גפ תונבל ידכמ ידמ .טבושמ א"נד לש עטק ליכמ אשנ לכ הבש הירפס רוציל ןתינ רפסה תא תוהזל דציכ - יומיד ןושלב וא ,יוצרה ןגה תא תוהזל דציכ ךא ךרדה .ךכל םיכרד שולש ראתנ ? הרישעה הירפסה ךותמ ופלושלו יוצרה ןגהשכ - םידדוב םירקימב קר הב רוחבל ןתינש אלא ,הטושפ הנושארה לש ןז ונידיב םא - לשמל ,לתשומה קדיחל הרסח איהש הנוכת דדוקמ רדחומה אל הלא םיקדיח .הסוטקלה ,בלחה-רכוס תא קרפל תלוכיה תא םירסחש םיקדיח היגרנאלו ינגרוא רמוחל רוקמכ הסוטקל ליכמה לודיג-עצמ לע לודגל ולכוי גפ תרזעב - הסוטקל קרפמה םיזנאה תא דדוקמה ןג תרדחה .קדיחה יכרצל עצמה יבג לע תוברתהל ,הסוטקלה תא לצנל קדיחל רשפאת - אשנכ ,אדבמל .תובשומ רוצילו ןהמ תחא .רתוי הברה תויללכ ןה םינג יוהיזל תורחאה םיכרדה יתש האלכה הנוכמה ךילהתב םיאלג תרזעב א"נד תובוקעמ יוהיז לע תססובמ יוהיז לע תססובמ הינשה ךרדה וליאו ,(היצזידירביה) תירלוקלומ .םיילוגס םינדגונ תרזעב ,םינגה ירצות ,םינובלחה תובשומ תא ריבעהל שי תירלוקלומה האלכהה תטישב טבושמ ןג תוהזל ידכ רינ יבג לע .דחוימ ןוניס רינל הירפסה לש םיגפה ידקומ תא וא ,םיקדיחה הדרפהלו ,םיאתה לש (סיזיל) תוררופתהל םימרוגה םיעצמא םיליעפמ ןוניסה - וניהד) עוביק רבוע יטוח-דחה א"נדה .הזמ הז א"נדה ילידג ינש לש לבטנ הז ןוניס רינ .ןוניסה-רינ לא (תימיכ הרישק לש ךרדב הדמצה תבוקעמ ושוריפ יאלג .יביטקאוידר רמוחב ןמוסמה יאלג הליכמה הסימתב םיאנתב .ןגה תבוקעמל תמאותה ,א"נר לש וא א"נד לש םידיטואילקונ ליכה אוה םנמוא םא ,גפב וא דימסלפב ורוקמש א"נדל יאלגה רשקנ םימיאתמ האלכה" רומאכ הנוכמה ,וז הרישקב חכוויהל לק .שקובמה ןגה תא םיאלגב םישמתשמ ירהש ,םוליצ-טרסל הפישח ידי-לע ,"תירלוקלומ .םייביטקאוידר רפסימ תודמוע םירקוחה תושרל ? םיאתמ יביטקאוידר יאלג םיניכמ דציכ אוהש ןובלחה בכרה עודי םא .תימיכ הסתניס איה םיכרדה תחא .םיכרד םידיטואילקונה רדס תא רזחשלו יטנגה ןפוצב שמתשהל ןתינ ,ןגה לש ורצות ,חנעפתנש רדסה יפל הזל הז םרשקל ,םידיטואילקונ לוטיל שי זא .א"נדב םשל ,לשמל ,הטקננ וז ןיעמ הטיש .הצקב יביטקאוידר ןמס דימצהל ףוסבלו םלואו .בלה-רירש לש ןובלחה תריצי לע יארחאה ןגה לש ותניחבו ויוהיז לע ןכרואב תולוע ןניאש תובוקעמ תוימיכ תוטישב ןיכהל ןתינ םויכ ,ךכל האוושהב ,עיגמ םינג לש םכרוא - םידיטואילקונ לש תודחא תורשע לשמל םא .תויפולח תוטיש םג םירקוחה םיסנמ ךכיפל .םיסיסב תוגוז יפלאל ןגה תא רתאל ןויסינב וב שמתשהל ןתינ ,םדא וניאש קנוימ דדוב המוד ןג הדימב םימאות םיעטק ויהי םינגה ינשלש הוקת ךותמ ,םדאה םונג ךותב שמתשהלו ןגה רצות אוהש ,חילש-א"נרה תא תוהזלו תוסנל םג רשפא .תקפסמ .יאלגכ ,רוחאל-קותעישה ךילהתב ויפ-לע רצונש א"נד טוחב וא ,וב ,ןג לש עטקב וא ,ןגב שומיש ,ןכ-םא ,אוה הטישה לש יללכה ןורקיעה .םימאות א"נד יעטק רחא שופיח םשל יביטקאוידר ןפואב ןמוסמה ,רומאכ ,איה םינג-תירפס ךותמ םייוצר םינג יוהיזל תרחא תיללכ ךרד םירידחמ הירפסה תא םיווהמה א"נדה יעטק תא .םיילוגס םינדגונב שומיש - רמולכ) ,יוטיב ידיל קדיחב אובי שקובמה ןגה יכ היפיצ ךותמ ,םיקדיחל ןובלחהמ םיקלח קר ורצוויש ,יקלח יוטיב קר ולו (ןובלח תריציל איבי רצותל םירשקנה םינדגונ תרזעב תוהזל זא ןתינ ןגה לש ומויק תא .שקובמה .ןובלח אוהש ,ןגה ןוקיתו ןוחביא ,הסדנה לש תועיבק םשל ונראתש תיטנג הסדנה לש תוטיש ןתוא תושמשמ םויכ רבכ קיודמה םבכרהו ,םינג לש הנבימ חונעיפל - ןאכמו ,םידיטואילקונ-יפצר 1000 תב תבוקעמ לש קיודמה הבכרה תא עובקל ןתינ םויכ .םינובלח לש התיהש וזמ םינומ תורשע ההובג תוריהמ - םימי רפסימ ךותב םידיטואילקונ ושרדיי הזכ ריהמ בצקב םגש רוכזל שי םלואו .םינש רשעכ ינפל ךא העודי .םדאה לש םונגב ללוכה ףצרה תא עובקל ידכב (!) רקחמ-תונש יפלא-תורשע ךכ םשל "ןמאל"ו ,יטמוטואל ךילהתה תא ךופהל ץמאמ םויכ השענ ךכיפל .םידחוימ םיטובור הסדנהה תוטישב שומישה אוה הבר תוריהמב ךלוהו-חתפתמה רחא חטש תשמשמ םויכ רבכ .ןטרס לשו תויפיגנ תולחמ לש ןוחביא םשל תיטנגה םא - םירבועב תויתשרות תולחמ רפסימ לש ןוחביא ךרוצל תיטנגה הסדנהה אל ןיידע וב ,רתוי םדקומ בלשב םאו ,ריפשה לזונב םיפחרמה םיאתב ץועייב הבושח המורת תיטנגה הסדנהה תמרות ךכב .ריפשה תפטעמ החתפתה .ינויחו קיודמ יטנג םיבלשבו תומקרב םינגה תואטבתה תא רוקחל רשפאמ םינג לש םדודיב לש תוטישב .םייחה ךלהמבו תירבועה תוחתפתהה ךלהמב םתוליעפ תאו םינוש תריצי לע םיארחאה םינגה לש האלפומה םתלוכי יכ ררבתה תיטנג הסדנה לע הקלחב תססובמ םינוש ןוסיח-ינובלח לש לודג הכ רפסימ דדוקל םינדגונ ,םינובלח םתוא תריצי לע תויארחאה תובוקעמה לש שדחמ-ןוגריא יכילהת .םינדגונה ךכבו ,שארמ תננכותמ הרוצב םידיטואילקונה ףצר תא תונשל ןתינ םויכ תוצמוחה בכרהב םיידוחיי םייונישב םינייטצמה םינובלח תריציל איבהל םינובלחה הנבימ לש רתוי הקימעמ הנבה גישנ וז ךרדב .םהלש תוינימאה לותשל ןתינ םיקדיחב וטבושש םינג .םדוקפיתל םנבימ ןיבש תולתה לשו םורגל - רמולכ ,אטבתהל ולכוי םהש ןפואב ,םדא-יאתבו םיחמצ-יאתב תויציבלו םיחמצ יאתל םינג תרדחהב םינושאר תונויסנ .םינובלח תריציל םיחמצ ולבקתה הלא םייוסינ תובקעב - החלצהב ורתכוה םירבכע לש תורפומ ,טבושמה ןגה תא ,םהלש םימוזומורכה יבג לע ,םבוחב םיאשונה םייח-ילעבו שי .םיינגסנרט םינוכמ הלאכ םייח-ילעבו םיחמצ .םהלש םונגהמ קלחכ .םדאב םייתשרות םימגפ ןקתל תיטנגה הסדנהה רשפאת דיתעב יכ תווקל םיירוטסיה ךרד-ינויצ .(Miescher) א"נד רמוחה יוקינ - 1869 .(Avery) םיקדיחב תויתשרותה תונוכתה תא עבוק א"נדה יכ החכוה - 1944 .(Watson, Crick) א"נדה הנבימל לופכה לילסה םגד תעצה - 1953 .(Arber) ,םיעקבמ םימיזנא יוהיז - 1962 - א"נר לש םידיטואילקונה תושלש לש ןבומה ,יטנגה ןפוצה חונעיפ - 1966 .(Nirenberg, Ochoa, Khorana) תוינימאה תוצמוחה תפשב חילש .(Gellest) א"נד יעטק החאמה םיזנא ,זגיל-א"נד יוהיז - 1987 .(Boyer, Cohen, Berg) א"נד טובישל תוטיש חותיפ - 1972 א"נדה :טוריפב) םידיטואילקונ םה ולש (םירמונומה) ןינבה-ינבאש רמילופ אוה :םיביכרמ השולשמ יונב ומצעלשכ דיטואילקונ לכ .(א"נד-לש-םידיטואילקונ דחאו תיתחרז הצמוח לש רייש ,זוביר-יסכואד הנוכמה ינמחפ-שמח רכוס לכ לש ודוחיי .G-ו C,T,A םהינמיסש םיינקנח םיסיסב העברא ךותמ דיטואילקונה הנוכמ ויפ לעו ,ינקנחה סיסבה ,אופיא ,אוה דיטואילקונ .G וא A,C,T ולוכ הצמוח לש ריישש ךכ השענ א"נדה ךרואל םידיטואילקונה ןיב רשקה דחא דיטואילקו) לש (5' ונמיס) 5 רפסימ ןמחפ םוטא ןיב רשקמ תיתחרז לש דחא הצקב .ךומסה דיטואילקונה לש (3' ונמיס) 3 רפסימ ןמהפ םוטאל הצק" הנוכמ הז הצק :תיתחרז הצמוח לש רייש ,ןכ םא ,יוצמ א"נדה טוח ."3' הצק" הנוכמ אוהו ,יתחרז רייש ןיא הלוקלומה לש ינשה הצקב ."5' תבוקעמ וא ,םידיטואילקונ לש ףצר הווהמה עטק) א"נד טוח לש עטק ךרוא .ללוכ אוהש םידיטואילקונה רפסימ יפ-לע עיבהל ןתינ (םידיטואילקונ לש לכ ירהש ,תבוקעמה ךרואלש םיינקנחה םיסיסבה רפסימל םג הוש הז רפסימ ,הנוכמ םידיטואילקונ הרשע ןב עטק .דחא ינקנח סיסב ליכמ דיטואילקונ םיסיסב יפלאב םידדמנ רתוי םיכורא םיעטק ."םיסיסב 10 לש עטק" ,ךכיפל .(kilo-base=kb) םינוכמה) א"נדה יטוח ינש - תיטוח-וד הלוקלומכ א"נדה עיפומ ליגרכ םירשקמ םיטוחה ינש ןיב .תבכר-יספ תמגוד הזל הז םיליבקמ (םילידג םג .םיטוחה ינשמ םיינקנח םיסיסב ןיבש - תיסחי םישלח םירשק - ןמימ-ירשק T-ל רושק A :םיסיסב לש םיעובק תוגוז ןיב םירצונ םיינמימה םירשקה םידיטואילקונה רדסש םייטוח-דח םיעטק ינש .G-ל רושק C וליאו (ךפיהלו) םייטוח-דח םיעטק ינש .ןמימ-ירשקב הזל הז דמצהל םיטונ ,םאות םהלש המילשמ AACTG תיטוח-דחה תבוקעמה :לשמל .םימילשמ םיעטק םינוכמ הלאכ רפסימב םיעיבמ םייטוח-וד א"נד יעטק לש םכרוא תא .TTGAC תבוקעמל תוגוז יפלא kbp) ב"זק ,םיסיסב-תוגוז-וליקב וא (bp) םיסיסבה תוגוז .(םיסיסב קוידב המצע תא תלפכשמה תינבת תשמשמ איהש ךכב תדחוימ א"נדה תלוקלומ ;רוקמל תוהז א"נד תולוקלומ יתש תורצונ א"נד לש תחא הלוקלוממ - בר םיזנאה .םייח םירוצי לש םתייברלו םיאתה תקולחל סיסבה אוה הז לופכיש -דח ,תירוקמ א"נד תינבתל ודמצנש םיישפוח םידיטואילקונ הזל הז רשוקה -א"נד) "א"נד לפכשמה םיזנאה" הנוכמ ,שדח םילשמ טוח תריצי ךות ,תיטוח א"נר לש תולוקלומ תונבינ היפ-לעש תינבתכ םג שמשמ א"נדה .(זרמילופ ןפואב הנבינה ,(mRNA) חילש-א"נרה .א"נר לש םיישפוח םידיטואילקונמ לש תרדגומ השלש :םינובלחה םינבנ היפ-לעש תינבתכ שמשמ ,הז ךילהתב תרדגומ תינימא הצמוח תבצה תעבוק חילש-א"נרב םידיטואילקונ קותעיש הנוכמ א"נדה םגד יפ-לע חילש-א"נר תינב ךילהת .ןובלחה תינב יפיגנמ קלחב קר .םייחה םירוציה לכב םייקתמ אוהו,(transcription) א"נרה תינבת יפ לע (יטוח-דח) א"נד תינב :ךפוהמ ךילהת שחרתמ א"נרה reverse) "רוחאל קתעשמה םיזנאה" תרזעב לעופל אצוי הז ךילהת .יפיגנה .(transcriptase ללכ-ךרדב יהוז -"ןג" הנוכמ דחא ןובלח לש הנבימ עבוקה א"נד עטק יח-רוצי לש םינגה לולכימ .םידיטואילקונ יפלא וא תואמ תללוכה תבוקעמ ,םידחוימ םינובלח םע דחי ,ןגראתמ אתבש א"נדה בור .ולש םונגה אוה .םימוזומורכ םינוכמה םינבימל+- +- |
|
|
הרזח תעה בתכב שופיח | תורבוחה תמישרל | רגאמה תודוא לע תינונסל | עדימה ירגאמו תעה יבתכ תמישרל בשקותמה ךוניחה םודיקל תינונס תתומעלו םיעדמה תארוהל זכרמל ,2002 © תורומש תויוכזה לכ www.snunit.k12.il/write_to_us.html : תבותכל םכיתועצה תאו םכיתורעה תא לבקל חמשנ | |